PRÁCTICA No. 3: "DETERMINACIÓN DE HEMATOCRITO"

PRÁCTICA No. 3: "DETERMINACIÓN DE HEMATOCRITO"

DETERMINACIÓN DE HEMATOCRITO

OBJETIVO

Aprender a realizar la prueba del hematocrito utilizando el macro y micrométodo, conocer su importancia en el diagnóstico de enfermedades y la forma adecuada de su procedimiento.

FUNDAMENTO

El hematocrito es un examen de sangre que mide el porcentaje del volumen de toda la sangre que está compuesta de glóbulos rojos. Esta medición depende del número de glóbulos rojos y de su tamaño. El resultado se expresa en porcentaje.

El hematocrito casi siempre se ordena como parte de un conteo sanguíneo completo (hemograma).

Para la realización de esta prueba, con el macrométodo, la sangre se extrae típicamente de una vena, por lo general de la parte interior del codo o del dorso de la mano.

Cuando se inserta la aguja para extraer la sangre, algunas personas sienten un dolor moderado, mientras que otras sólo sienten un pinchazo o sensación de picadura. Posteriormente, puede haber algo de sensación pulsátil.

Un volumen de sangre se deposita en un tubo de Wintrobe, por medio de una pipeta, hasta la marca del 10 y se debe de centrifugar. Al terminar la prueba, deben de quedar separados el plasma de la sangre y las células, depositándose en el fondo y presentando un color rojo intenso.

Para la realización del micrométodo, se utilizan unos tubos de un calibre muy delgado, llamados capilares, y pueden ser llenados con la misma sangre venosa o de capilar. Este último es el más usado, por ser más rápido y menos riesgoso al usar sangre capilar. Para su lectura se usa una escala estandarizada.

MATERIAL

v  Tubo de Wintrobe graduado de 0-100 mm

v  Pipetas Pasteur

v  Equipo para venopuncion (Tubo lila)

v  Tubos capilares azules o rojos

v  Plastilina

v  Encendedor o cerillos

v  Centrifuga

v  Microcentrifuga 

SUSTANCIAS:

Ø  Alcohol al 70%

Ø  Sangre venosa

PROCEDIMIENTO

Para macrohematocrito:

1.    Una vez seleccionada, se desinfecta la zona con alcohol al 70%, y se practica punción venosa. La sangre es recogida en un tubo lila con EDTA

2.    Llenar el tubo de Wintrobe con la sangre extraída con anticoagulante ayudándose de una pipeta Pasteur, comenzando desde el fondo hasta la marca superior de 100 mm, teniendo cuidado de no provocar espuma ni dejar burbujas en el tubo.

3.    Se recomienda como medida de precaución tapar el tubo con un tapón de goma para evitar la evaporación

4.    Centrifugar a 3000 rpm durante 30 minutos

5.    Leer directamente de la graduación la columna de glóbulos rojos y anotar resultados

Para Microhematocrito:

1.    Tomar la muestra en capilares rojos heparinizados directamente del dedo, o utilizar capilares azules sin heparina para sangre venosa con anticoagulante EDTA. Debe llenarse aproximadamente 70-80% del capilar, sin dejar burbujas de aire.

2.    Ocluir (tapar) el extremo del capilar que no estuvo en contacto con la sangre, con plastilina o sellando con fuego

3.    Colocar el capilar sobre la plataforma del cabezal de la microcentrifuga, con el extremo ocluido adherido al reborde externo de la plataforma

4.    Centrifugar por 5 minutos entre 10 000 y 12 000 rpm

5.    Para leer el resultado, se lleva a cabo una regla de tres, midiendo el volumen total de plasma y eritrocitos o por medio de la regleta.

6.    Para la regleta, se sostiene el tubo frente a la escala de manera que el fondo de la columna de eritrocitos, quede exactamente al mismo nivel de la línea hroizontal correspondiente al cero

7.    Desplazar el tubo a través de la escala hasta que la línea marcada con el 1.0 quede al nivel del tope del plasma.  El tubo debe de encontrarse completamente en posición vertical.

8.    La línea que pase al nivel del tope de la columna de eritrocitos indicara la fracción del volumen de estos.

OBSERVACIONES

Tras una centrifugación de la sangre total se pueden apreciar dos niveles, uno con el depósito de los glóbulos rojos, principalmente y en color rojo oscuro, otra capa blanca, de leucocitos y una delgada de color gris, que son plaquetas y finalmente otro nivel del plasma total, de un leve color amarillento. 

RESULTADOS

En el tubo de Wintrobe se mide directamente el nivel de la columna de glóbulos rojos, comparando el número de la lectura con los siguientes porcentajes:

Hombres: 47.0 ±5.0%

Mujeres: 42.0 ±5.0%

Niños (5 años) 38%-44%

Lactantes (3 meses): 37-42%

Recién nacidos: 50-58%

PRÁCTICA No. 2: "PUNCIÓN VENOSA"

PRÁCTICA No. 2: "PUNCIÓN VENOSA"

PUNCIÓN VENOSA

OBJETIVO

Establecer y uniformizar criterios en el procedimiento de obtención de muestras sanguíneas, así como aprender a tomar la muestra por punción venosa, y aplicar dichos criterios al momento de hacerlo.

FUNDAMENTO

Los vasos sanguíneos son los conductos que conducen la sangre, y se dividen en arterias, venas y capilares.

Las venas son los conductos que llevan la sangre de los tejidos al corazón. Están constituidas por tejido muy similar a las arterias, a diferencia de que las venas el tejido muscular y elástico es menor y la adventicia es más gruesa, razón por la cual soportan menos presión.

Otra diferencia importante es que en su trayecto presentan válvulas que facilitan el regreso de la sangre al corazón.

Las venas más utilizadas para la venopunción están localizadas en el área

antecubital:

a) Vena Cubital: Es la más larga y gruesa de todas y es la preferida por bordear la musculatura del brazo.

b) Vena Cefálica: Tiene iguales características de la anterior, pero es un poco menos gruesa.

c) Vena Basílica: Es más pequeña que las anteriores. Esta vena está cerca de la arteria braquial, por lo que su punción es riesgosa y su área es más sensible y dolorosa para el paciente.

Debido a que la sangre se utiliza para múltiples funciones dentro del cuerpo, los exámenes de sangre o de sus componentes pueden suministrar indicios claves para el diagnóstico de muchas condiciones médicas.

MATERIAL

v  Algodón

v  Ligadura o torniquete de 25-30 cm

v  Jeringa desechables de 5 ml

v  Tubos con anticoagulante EDTA

v  Equipo Vacutainer

v  Portaobjetos

v  Cuba de tinción

v  Pizeta

v  Placa excavada

SUSTANCIAS

Ø  Colorante de Wright

Ø  Buffer de fosfato

Ø  Alcohol al 70%

Ø  Antisueros A, B, AB y D

PROCEDIMIENTO

1.    Verificar que los elementos por usar estén listos y que el paciente se sienta cómodo

2.    Aplicar el torniquete aproximadamente cuatro dedos por encima de la flexión del codo o a 10 cm del codo y sujetar con un medio nudo.

3.  Limpiar la zona con una torunda de algodón embebida en alcohol en un área de 2 pulgadas

Para extracción con jeringa

1.    Se retira el estuche protector de la aguja y se coge con la jeringa de tal manera que el bisel se encuentre hacia arriba

2.     Colocar la aguja en dirección paralela a la vena, se perfora la piel haciendo avanzar la aguja 0.5-1 cm en el tejido subcutáneo, luego se perfora la vena

3.    Se aspira con la jeringa hasta el volumen requerido

4.    Retirar el torniquete e indicar al paciente que deje de hacer fuerza en el puño. Se coloca la torunda encima de la punción y se retira la aguja.

5.    Retirar la aguja de la jeringa. Verter la muestra lentamente por las paredes del tubo con anticoagulante.

Con sistema Vacutainer®:

1.    Se destapa la aguja por el lado de la guarda que no tiene color y se enrosca en la base.

2.    Una vez armada la base, se accede a la vena con la aguja, en forma horizontal, y se introduce con el bisel hacia arriba

3.    Cuando la sangre fluya por la aguja, se debe de  realizar la aspiración, colocando el tubo dentro de la base y haciéndolo que se perfore el tapón con la otra parte de la aguja, para que el vacío que contiene el tubo aspire la sangre necesaria. 

4.    Al llenarse el tubo, se retira de la base, procurando no mover la aguja de su posición.

5.    Colocar la torunda sobre el lugar de punción, retirar el torniquete y extraer la aguja.

6.    Agitar el tubo de 4 veces, suavemente, para homogeneizar la muestra con el anticoagulante.

7.    Realizar frotis, y teñir con el método de Wright

8.    Realizar en una placa excavada grupos sanguíneos.

OBSERVACIONES

Frotis sanguíneo 100x

Se observa la gran cantidad de eritrocitos que abundan en el frotis y en la sangre circulante. Se distingue en el centro un leucocito, en su forma de eosinófilo 

Frotis sanguíneo 100x

Al centro distinguimos un neutrófilo

Frotis sanguíneo 100x

Aquí se aprecia un monocito, con su núcleo ligeramente arriñonado

Frotis sanguíneo 100x

Aquí hay un basófilo, lleno de sus característicos gránulos que impiden ver con claridad su núcleo

Frotis sanguíneo 100x

Se distinguen dos linfocitos, con su gran núcleo morado y se pequeño aro azul

 

Grupos sanguíneos
No aglutinó en ninguno, por lo tanto es O y el factor Rh  es positivo, pues era el único que presentaba 

aglutinación

 RESULTADOS

Al extraer la sangre, esta es de color rojo oscuro, y como se extrajo con anticoagulante se obtuvo plasma y elementos formes. Su consistencia era liquida.

 Al realizar la prueba de grupos sanguíneos, como no apareció aglutinación en ninguno de los orificios marcados con A, B, o AB, se determinó que el donador, Adain Pacheco Ramírez, era grupo O Rh positivo.

En el frotis, se encontraron abundantes eritrocitos, algunos con deformaciones, como acantocitos, o eliptocitos, pero no en gran cantidad. Fue posible diferenciar todas las células blancas.

Para observar el frotis, tenía que ser delgado y uniforme, o de lo contario las células no se verían 

CONCLUSIÓN

La venopunción consiste en acceder al torrente sanguíneo, para extraer una muestra de sangre y así, mediante una gran diversidad de pruebas, diagnosticar enfermedades.

Antes de acceder a puncionar se debe considerar una serie de parámetros relevantes para el éxito de la punción, tales como:

·         Las condiciones físicas y psicológicas que trae el paciente, (debe estar en ayunas, tranquilo, sin nerviosismo)

·         Considerar un tiempo adecuado para explicar el procedimiento (lo que es esencial para disminuir la ansiedad).

·         Considerar las condiciones en que será tomada la muestra, sentado o en camilla

·         Verificar que en el sitio a puncionar se encuentra indemne y lejos de focos de infección.

·         El éxito de la punción depende de varios factores tales como los recursos, habilidad del manipulador, tipo de examen a realizar, edad del paciente (el sistema de vacio no se recomienda en niños, ni ancianos por su fragilidad capilar)

Las muestras se pueden extraer con o sin aditivos, y dependiendo su uso será su tubo:

Todos los tubos con anticoagulante hay que agitarlos suavemente invirtiendo los tubos 4 veces. Si se hace muy fuerte o muchas veces se puede producir hemólisis y si no lo hacemos suficientemente producirá coagulación.

Es importante recordar que en el área de hematología, se usa la sangre para exámenes como:

—  Grupos sanguíneos

—  Biometría hemática

—  Diferencial

—  Tiempos de coagulación

—  VSG

—  Hematocrito

En serología:

—  Detección de anticuerpos

—  Química sanguínea (glucosa, triglicéridos, colesterol, PFH, etc.)

—  Prueba de embarazo

—  Reacciones febriles

—  Rosa de bengala

—  Detección de Inmunoglobulinas,

En toda punción se debe de tomar en cuenta lo siguiente:

- Si no se puede extraer la sangre, se retira el torniquete y la aguja. Aunque no se haya podido extraer la sangre debe de controlarse el sitio de punción y presionar esa zona.

-Nunca puncionar dos veces seguidas en el mismo sitio.

-Nunca puncionar a pacientes con hematoma.sangre).

Se deben evitar algunas zonas para hacer la punción venosa:

1.    Excesivas cicatrices de quemaduras o de suturas quirúrgicas.

2.    El hematoma azulado, además de ser doloroso, puede producir resultados erróneos.

3.    En general la sangre nunca debe extraerse de un brazo con una fístula o cánula.

4.    Extremidades edematosas (los tejidos con acumulación de líquidos alteran los resultados).

Tinción de Wriht

 Tinción de Wriht

La Tinción de Wriht es un tipo de tinción usada en histología para facilitar la diferenciación de los tipos de células de la sangre. se usa principlamente para teñir frotis de la sangre y punciones medulare, para ser examinadas al microscopio.

FUNDAMENTO

Los vasos sanguíneos son los conductos que conducen la sangre, y se dividen en arterias, venas y capilares.

Los capilares son conductos sumamente delgados que se entrelazan formando redes entre las arterias y las venas. Están constituidas por una sola capa de células epiteliales planas (endotelio) que les permite ser muy permeables.

MATERIAL:

• Algodón

• Portaobjetos

• Cuba de Tinción

• Pizeta

• Tubos capilares

• Lancetas desechables y estériles

• Pipetas Pasteur

SUSTANCIAS:

•  Colorante de Wright

•  Buffer de fosfato

•  Alcohol al 70%

•  Agua 

PROCEDIMIENTO

1.    Una vez seleccionada la zona, se desinfecta la zona con alcohol al 70%, secar con algodón estéril.  Punzar la piel con una lanceta estéril desechable (2 mm de profundidad).

3.    La primera gota de sangre se deja perder, limpiándola con la gasa sin tocar la zona pinchada

4.    Se espera a que caigan más gotas, sin exprimir el área pinchada porque eso diluiría la sangre con líquido extracelular. Se recogen las gotas de sangre necesarias sobre alguno de estos objetos:

ü  La tira reactiva.

ü  Tubo capilar, mientras se tapa su otro extremo con el dedo. Después de la recogida se pincha el tubo capilar en plastilina para que un pequeño fragmento de ésta obstruya su extremo o se sella con calor

ü  Sobre un portaobjetos, si es necesario estudiar una extensión de sangre. En este caso, se recogio en un portaobjetos.

5.     Aplicar tinción de Wright

   6.    Observar al microscopio para diferenciar células sanguíneas.

 

 

 

 

 

 

 

 

OBSERVACIONES

Frotis sanguíneo 10x

Se observa la gran cantidad de eritrocitos que abundan en el frotis y en la sangre circulante.  

Frotis sanguíneo 40x

Se distinguen en este par de imágenes el frotis anterior, más detallado, la estructura de los eritrocitos, y el núcleo del leucocito al centro, el cual está teñido de color purpura 

                   

Frotis 100x

En una de las partes del frotis macroscópicamente más claras, se aprecian a gran detalle los eritrocitos, con el centro mas pálido, debido a su forma bicóncava. Destaca en el centro un conglomerado de plaquetas

Frotis 100x

Diversos eritrocitos, con un neutrófilo en el centro del campo donde se puede distinguir con claridad su núcleo, y plaquetas conglomeradas en todo el campo

Frotis teñido 100x

Se aprecia a los eritrocitos encimados unos de otros, y entre ellos destacan por su tamaño, color y forma tres neutrófilos, dos a la una y otro a las cinco, con sus característicos núcleos polimorfos.

Frotis 100x

Se distingue a las dos un codocito o célula en forma de blanco. A su lado izquierdo un linfocito, con su característico núcleo enorme y a las 9 un neutrófilo

RESULTADOS

Como puede verse, es posible distinguir algunas de las células o elementos formes de la sangre, abundando en gran cantidad los eritrocitos, de los cuales la mayoría presentaba forma redonda con centro pálido, debido a su biconcavidad y otros más eran eliptocitos y solo fue encontrado un codocito como la forma más rara.

En cuanto a los leucocitos, abundaron los neutrófilos y unos cuantos linfocitos. No fue posible distinguir con claridad a los demás tipos de leucocitos, sin embargo esto no indica que no haya presencia de ellos en la sangre.

Las plaquetas, por lo regular se encontraban conglomeradas, presentándose como cuerpecillos diminutos color púrpura.

Debido a la falta de sangre, no fue posible llevar a cabo un micro hematocrito.

Pero cabe recordar que la finalidad de la práctica no es establecer todavía un diferencial, sino tomar la muestra correctamente.

 dr.vicmar_4_4_4@htmail.com